化学发光研发生产中的5个关键误区！

化学发光研发生产中的5个关键误区！

   化学发光免疫分析（CLIA）将高灵敏度的化学发光技术与高度特异性的免疫反应相结合，建立了化学发光免疫分析方法。CLIA具有灵敏度高、特异性强、线性范围宽、操作简便、使用成本低等特点。CLIA的应用范围很广，不仅可以检测不同分子大小的抗原、半抗原和抗体，还可以检测核酸探针。由于其优点，基于该技术的体外诊断测试的数量日益增加。而每当医院或诊断实验室安装化学发光分析仪时，其相应试剂盒的需求量每天可能会达到数千套。

因此，CLIA IVD试剂盒的需求开始猛增，但早期的小规模生产、纯手工操作和简单的质量控制方法已经不能满足大规模生产的需求。如何保证批次间的一致性；扩大生产后如何保证质量的稳定性；如何保证成品最终应用的有效性（最终在分析仪中使用不超过几百微升）都是作为CLIA IVD试剂盒制作的关键。在十多年的发展过程中，我们发现了生物磁分离过程中的五个关键缺陷。这些误区很容易被忽视，但却常常延误工程进度，造成重大经济损失，有时甚至使生产面临风险。因此，正确掌握磁选技术信息是保证产品研发和生产成功的关键。

如何描述生物磁分离过程？

当新的 CLIA-IVD 试剂盒从研发阶段转移到生产阶段时，所有生产操作参数都需要重新调整，以适应新的吞吐量和处理量。生物标记物、缓冲液和涂层操作的规格均受益于非磁性试剂盒生产中积累的经验。抗体和磁珠的偶联与胶体金或乳胶颗粒非常相似，但使用磁力分离的洗涤过程的操作与其他非 CLIA-IVD 试剂盒的生产有很大不同。

尽管在 CLIA 试剂盒制造的分离阶段使用生物磁分离似乎是显而易见的选择，但在实践中仍然存在一些问题。首先是描述整个过程本身。在与IVD试剂盒厂家沟通时，他们在生物磁分离方面经常提到以下几个方面：

分离时间：固相与缓冲系统分离的时间。

珠子损失：生产过程中损失的珠子（和结合生物标记物）的最大数量。

批量处理量：要处理的批量大小，甚至在某些情况下处理量也是有弹性的。避免不可逆聚集：如果在生产过程中出现磁珠不可逆聚集，需要通过各种方式进行重悬。暂停后必须检查是否处理得当。由于每个试剂盒（毫升水平）需要相同的特性，因此不正确的重悬处理会增加批次间的变异性。

然而，这些都是“功能”参数，它们是磁分离的结果，而不是影响分离过程的因素。在生物磁分离的整个过程中，真正缺失但却定义了整个分离过程的参数是什么？

生物磁分离过程中的一个关键参数是磁力。磁珠以特定速度移动，这是由于磁力和阻力之间的竞争而产生的净力，后者是由缓冲液粘度引起的

误区一：总是磁珠不好造成的

用户在选择磁珠时，非常关心自己是否选择了“正确”的磁珠。假设已经选择了合适的生物标志物和完美的偶联/包被方法，那么用户选择的“正确”磁珠应该具有以下特征：

1) 高回收率/快速分离，与分析设备中的时间相匹配，磁分离速度足够快，可以在不损失大量磁珠和偶联生物标志物的情况下扩大规模？

2) 无聚集问题，磁珠可以很容易地重新混合和悬浮。即使可以通过一些额外的超声处理步骤来恢复珠子聚集？（但这在量产时很难控制和操纵）

3) 批次间差异低，每批等分试样（通常小于毫升）和生产批次（升级）必须一致。如果不是，差异会影响分析仪给出的结果

  如果不满足上述要求会怎样？

试剂盒制造商对有缺陷的磁分离结果最常见的反应是磁珠的选择是“错误的”。然后制造商联系磁珠供应商（或替代供应商）对磁珠进行长期讨论，重新审视包被方法等。如果陷入这个阶段，新产品的开发和上市就会受到影响。影响严重，进度将大大延误。

提示：如果生物标记物与珠子耦合良好，则在出现问题时更换珠子将是一项昂贵且耗时的工作，同时仍然无法有效解决问题！

生产商应摆脱“正确”和“错误”磁珠的纠缠，专注于生物磁分离设备和设备。通过对比下图我们可以发现，同样的悬浮磁珠在不同生物磁分离器的作用下会表现出完全不同的表现

图 2 左侧显示了传统磁力架（蓝色）处理磁珠的缓慢分离。

这意味着完成分离的时间更长或珠子和生物标记物的损失更高。然而，如果等待较长的分离时间以避免损失，一些珠子将遭受不可逆的聚集问题，因为首先分离的珠子（最接近瓶壁）受到非常强的磁力的作用，将珠子挤压在一起。如果在这个分离步骤中，我们不考虑分离设备的影响，而仅仅从磁珠的分离性能来判断，那么我们就会得到一个错误的结论：必须更换其他磁珠才能解决问题。同时，我们从图2中可以观察到，同样的磁珠悬浮液通过先进的生物磁分离装置（右侧橙色）可以看到分离效果完全不同。磁珠以相同的速度快速分离，并且由于磁力均匀，贴壁磁珠在更短的时间内受到温和的磁力，消除了不可逆聚集的风险。