双切试纸,适用于CRISPR、AGO系统
单重 CRISPR 检测条,与 AGO 兼容
设计见下图
探针两端引入了两个小分子标记物 FAM 和生物素。抗FAM抗体用胶体金标记,NC膜上的检测线涂有可结合生物素的链霉亲和素。
调整探针浓度(建议100nM/L),保证在不剪探针时,上图红线处捕获所有胶体金微球,质控线出现,检测线不出现,结果是负数。
探针剪断后,会有胶体金微球穿过红色C线到达上图中蓝色线的位置,并被抗FAM抗体(羊抗鼠)捕获,检测线将出现,结果将是积极的。
强烈推荐:
双切割检测条,CRISPR,AGO 兼容
在单切试纸上,在T线位置使用山羊抗鼠。羊抗鼠是非特异性捕获小鼠单克隆抗体,但由于只有一条T线,只需区分探针是否被切割,因此没有任何作用。如果想要实现检测双切口的试纸条,则不能采用这样的设计。
如下图所示,如果T1线和T2线仍然使用羊抗鼠,则无法区分捕获的微球是抗FITC/FAM还是抗DIG。
为了确定是哪一个探针被切割,我们使用了特异性捕获anti-FITC/FAM和特异性捕获anti-DIG的适配体,并进行了反向筛选,以保证两种适配体的特异性。这样测试的时候就不会出现交叉点。
下图为实际测量图片,探针添加量为100nM/L,在没有CAS酶或AGO酶裂解的情况下进行测试。