巴掌大小的猴痘POCT核酸检测技术!
研究总结
猴痘(以前称为猴痘)的爆发已被宣布为国际关注的突发公共卫生事件。然而,传统的聚合酶链反应(PCR)诊断技术并不适合现场应用。
为了在实验室外进行从样本到结果的 Mpox 病毒颗粒检测,作者开发了一种易于操作的手掌大小的袋子,称为 Mpox 家庭自检和卡住袋 (MASTR Pouch)。
在这个手持式实验室(MASTR Pouch)中,通过将重组聚合酶扩增(RPA)与CRISPR/Cas12a系统相结合,实现了快速、准确的视觉检测。从病毒颗粒裂解到视觉读数,MASTR Pouch 只需四个简单步骤即可在 35 分钟内完成分析过程。渗出液中可检出 53 个 Mpox 假病毒颗粒(10.6 个/μL)。
为了测试实用性,对 104 个模拟 Mpox 临床渗出液样本进行了测试。临床敏感性测定为91.7%-95.8%。没有出现假阳性结果,并且验证了 100% 的临床特异性。MASTR Pouch 接近世界卫生组织即时护理诊断标准 (ASSURD),这将有利于减轻 Mpox 的全球传播。MASTR 袋的多功能性可能会进一步彻底改变感染诊断。
关键技术
CRISPR技术;传染病; 综合检测工具;痘痘;POCT诊断;重组酶聚合酶扩增
a) RPA-CRISPR/Cas12a综合检测总体原理示意图;
b) 使用手掌大小的 MASTR Pouch 检测 Mpox 病毒,操作简单。
a) MASTR Pouch中的主要部件,包括迷你吸管、即用管、采样管、迷你电源箱、自动读数装置(ARD)和MHP30迷你恒温加热块;
b) ARD的内部结构;
c) 检测生理岩水中不同拷贝的 Mpox B6R 质粒(来自 6. 9×104对0份);
d) 通过检测不同数量的B6R型Mpox假病毒获得的代表性图像(范围从5.3×104比0病毒颗粒)在生理岩水中;
e) 检测不同数量的 B6R 型 Mpox 假病毒(范围从 5.3×104 比 0 病毒颗粒)在渗出液基质中。
a、b) 比较标准 qPCR 检测和基于 MASTR Pouch 的检测结果的混淆矩阵。模拟临床标本的制备和检测遵循三盲规则。靶基因是(a)B6R基因或(b)F3L基因。
c) 基于 MASTR Pouch 的检测的阳性结果与 qPCR 检测的 Ct 值之间的相关性。