自身免疫、抗GP210抗体检测
以HEp-2细胞为底物,采用间接免疫荧光法检测ANA时,可在PBC患者血清中检测到外周荧光模型,其靶抗原为分子量为210kD的核孔膜糖蛋白,故称为GP210蛋白、抗GP210蛋白对PBC有重要的诊断价值。临床上通常采用ELISA进行检测。
抗糖蛋白 210 抗体(AGPA、抗 gp210、抗 nup210、抗 np210)以 gp210 为靶点,在原发性胆汁性肝硬化 (PBC) 患者中出现频率很高。AGPA 识别蛋白质面向细胞质的羧基末端(尾部)。尽管仅在少数 PBC 患者中发现 AGPA 作为预后标志物,但那些确实具有较高死亡率且预计预后较差的患者。此外,与抗 gp210 Ab-name 队列相比,对熊去氧胆酸 (UDCA) 治疗有反应并因此降低 AGPA 的患者未能发展为终末期肝病。Nup210 是一种潜在的免疫耐受逃逸因子,在具有潜在破坏性 AGPA 的 PBC 患者的胆管中含量增加。
(PBC) 还发现了抗线粒体、抗着丝粒和抗 p62 抗体。当 AGPA 患者进展至终末期肝衰竭时,具有抗着丝粒抗体的患者往往会出现门静脉高压,这进一步表明 AGPA 在 PBC 中具有特殊作用。
【原理】 将纯化的核膜蛋白GP210抗原包被于聚苯乙烯微孔板上。若待测血清中存在能与其结合的抗GP210抗体,则洗涤除去非特异性结合物质,然后加入酶标抗GP210。免疫球蛋白抗体(又称二抗或抗抗体,通常是抗IgG抗体),该抗体与已与固相抗原反应的抗体特异性结合,洗涤除去未结合的酶标二抗,添加底物,酶催化显色产物的生成,显色的深度与标本中抗GP210抗体的浓度成正比。
【试剂】试剂组成:GP210蛋白包被的微孔板、酶标二抗、酶底物溶液、阴性对照、阳性对照、样品稀释液和浓缩洗涤液等。
【操作】按照试剂盒使用说明书或实验室制定的SOP进行操作。主要操作流程为:样品稀释→上样标准品或样品→孵育反应→冲洗→添加酶标二抗→孵育反应→冲洗→显示颜色→终止反应→结果判读。
【结果判定】
1、定性检测 显色度低于截止值则为负值,高于截止值则为正值。
2、定量检测用酶标仪检测标准反应孔的吸光度值,绘制吸光度-浓度标准曲线,根据标准曲线即可求出抗GP210抗体的浓度。
【参考区间】
1. 正常人的定性检测通常呈阴性。
2. 对于定量检测,每个实验室应建立自己的参考区间。若采用文献或说明书提供的参考区间,使用前应进行验证。
【临床意义】 抗GP210抗体对PBC有一定的敏感性(38%)和较高的特异性(99%),特别适用于抗线粒体M2抗体阴性的PBC的诊断。因此,抗GP210抗体与线粒体M2抗体联合检测对于提高PBC的检出率具有重要意义。