诊断试剂反应曲线“点取”法
1.终点法（END POINT METHOD）
根据反应达到平衡时反应产物的吸收光谱特征和吸光度，对该物质进行定量分析的方法。对于一般化学反应来说，当反应完成（或正逆反应动态平衡）且反应产物稳定时，就是反应的终点。对于抗原抗体反应来说，终点是抗原和抗体完全反应并形成最大且稳定的免疫复合物。反应时程曲线上有一条平行于X轴的线段。从测量和计算方法来看，一般分为一点法和两点法两种。
1、一点法（ONE POINT） 以试剂与样品混合前的空气空白（GB）、水空白（WB）或试剂空白（RB）的吸光度值作为测定计算的基点，以从空白读数中减去反应结束时的吸光度读数以获得反应吸光度。通过与相同条件下校准溶液的反应吸光度比较，得出测定结果。常与一点校准法配合使用，即使用一个校准浓度，校准曲线通过
通过零点并变为线性。还应用多点校准。
2、两点终点法（TWO POINT END），即终点-起点法，以试剂与样品混合后的某一时间点为起点，从读数中减去起点读数。反应结束时读取吸光度。在一定条件下，样品对反应或反应本身的特异性会降低（主要指色度干扰）。常使用双试剂，通常以加入R2之前的点作为测量的起点；在某些情况下，添加R2之后的点也可以作为测量的起点。当使用单一试剂、主反应开始太快或仪器初始读数点有限时，使用起来很困难。
固定时间法（FIXED METHOD）与两点终点法的区别在于测量读数的终点不在反应平衡段，而是根据方法学选择。如血清肌酐（苦味酸法）测定。
3、三点终点法即双终点法，一次在一个通道中测定两个与反应相关的终点方法。例如，游离脂肪酸和甘油三酯一起测量。部分仪器（如HITACHI系列）设置此方法。
二、连续监测法（CONTINUOUS MONITORING METHOD）
又称速率法（RATE ASSAY）。即连续监测反应过程，根据测得的产物形成速率或底物消耗量进行定量分析的方法。反应时程曲线上存在反应的恒速段（斜率保持恒定），常用于测定酶活性的线性反应周期。
1、连续监测方法是零级反应速率法，又称斜率法。在较长的反应时间段内（至少90-120秒），每隔一定时间（一般为2-30秒）读取吸光度值，至少读取4个点，得3℃A；多次读数时采用最小二乘法，读数间隔过短时采用带速率时间（TR）的多点法。将线性反应部分的读数全部取出，得到单位时间的反应速率△A/MIN。这种方法必须建立在零级反应的基础上，因为只有在零级反应下，单位时间内吸光度的变化（反应速率△A/MIN）才与酶活力成正比。该方法相对减少了分析误差，大大提高了分析速度和精度。但半自动生化分析仪采用的是单样本连续监测，相当耗时。应用连续监测方法，首先应制备线性范围内的高、中、低浓度样品，分别绘制反应时程曲线，以了解不同浓度下反应的全过程，考虑延迟时间和线性监测周期的确定。
2、两点速率法就是所谓的伪一阶速率法。选择反应中两个时间点T1和T2，读取吸光度A1和A2，计算(A2-A1)，(T2-T1)=△A，△T。该方法与终点两点法有两个主要区别：后一个读数点的反应没有达到终点，结果是根据速率计算的。与连续监测法相比，其缺点是T 1 和T 2 是人为确定的，不确定因素较多，不能保证T 1 -T 2 期间反应呈线性，影响了测定的准确性。结果; 在常规测量之前应进行初步测试以确定线性时间段。如果在选定的时间段内反应不是线性的（如零级反应周期短，仪器无法设置或测量），则只能用终点法代替。优点是方法简单；当酶活性较低、测得的吸光度值较小时，可以增加测量时间段，不受仪器连续监测时间点的限制，减少读数误差。
3. 速率 B 方法一次在一个通道中执行两次与反应相关的速率方法测定。可用于两次试验的测定，也可用于干扰或/和样品空白的自动补偿。第一个反应速率的连续效应可以从第二个反应（主反应）的速率中减去。例如用于消除胆红素转化为胆绿素的吸光度下降，苦味酸法对肌酐测定的负面干扰等。有些仪器（如HITACHI系列）设置了此方法。
三、空白（BLANK）校正
在分光光度法中，空白溶液常用于调整仪器的吸光度零点，或抵消测定中的一些干扰因素。在生化分析仪测定中，除了采用双或多波长、两点法等消除背景干扰外，往往还需要采用专门的空白测量，以便从吸光度中扣除其影响。样本的。正确选择空白校准对于提高准确度具有重要作用。
1. 试剂空白一般按方法类型和校准模式分为有或无试剂空白两类。试剂空白单独测量或结合校准测量，需要预装去离子水样品杯或试剂空白架。校准或患者样品各测量点的吸光度应从相应测量点的试剂空白吸光度或空白率值中减去。对于没有试剂空白的方法，常采用比色皿中的水空白作为测定的参考值。
在许多仪器中，试剂空白测定类似于校准测定，并且在测量患者样本时不是实时进行的。因此，应注意其测定频率，避免因试剂批号或质量变化而导致试剂空白变化而导致计算误差。
2、样品空白主要是为了消除样品本身浊度或色度的干扰。常采用空白通道法，测量校准结果=显色反应通道结果-空白通道结果。大多数仪器要占用额外的测量通道，分析速度减半，但干扰去除精度要高于两点终点。
