层析过程中微球在膜上堆积的解决方案
挡球:
一般定义为标记结合物在结合垫和NC膜底部之间聚集的现象;
焊盘释放:
喷雾干燥后的标记物能否在判读时间内被样品溶液洗脱并在NC膜上进行色谱分析的过程;
喷球(金)方法:
通过划线器将记号笔均匀喷洒在焊盘上或浸泡;
冻干球(金)法:
将标记物分配到酶板或其他容器的孔中进行真空干燥和固化;
根据标记物的固定方式,POCT侧层析产品可分为:喷雾球(金)法和冻干球(金)法。
目前更多人倾向于使用喷球(金)法。优点是可以节省准备周期、减少包装步骤、降低正常成本等;标记物的使用量相对可控;客户端操作只需一步,操作容错率进一步降低。; 缺点是干燥后的标记物不易洗脱,且喷涂过程的均匀性放大了产品的CV值,需要对焊盘进行预处理。
在冻干球(金)法中,测试过程中首先将样品混合,也可以混合后孵育,然后再进行下一个样品加载过程。通常,该方法的产品灵敏度和CV优于喷球(金)法。该方法的缺点是标记物过多。在解释期间,显色逐渐增加。解释时间过后,T 线显色仍然存在。变化比较明显;如果进行定量产品开发,判读时间更加严格,加样量也会影响判读结果。
喷球(金)产品的堵球解决方案:
确保标记物的分散,并尽量保证标记过程中各溶解步骤不出现沉淀。如有,最好静置除去沉淀后再使用;
确保标记物在2-8度液态下可保存一周;主要考察标记物的稳定性以及相应溶液是否与相应标记物相匹配;
有样品稀释剂产品可通过
(1)首先在pH值相同的前提下,更换不同pH缓冲液对并添加0.5%T20。在保证色谱正常的前提下,检查堵球情况是否有所改善;
(2)在确定pH缓冲液对的前提下,确定不同pH值是否对堵球产生影响;
(3)一般情况下,这种两步调试可以解决堵球问题,但会牺牲一定的产品性能,如颜色强度等;
(4)如果操作(1)和(2)不能解决问题,可以相应测试不同表面活性剂之间的差异;
(5)若显色明显下降,可通过添加高分子聚合物进行调节;
如果产品没有样品稀释液,则在结合垫或样品垫上调整相应的工艺;
粘合焊盘的释放解决方案:
现有工程大多采用玻纤8964,一般需要预处理。不建议在加工接合垫时添加大量蛋白质,特别是酪蛋白;也不建议添加高分子聚合物来改善接合垫的显色。
喷涂量应尽可能少。有些项目可能显色性较差,需要增加喷涂量以改善显色性;
结合垫中可以适当添加T20,但需要根据标记物的特性进行。有些项目可能会出现老化过程和显色度下降。
焊盘可以通过添加小分子醇或多糖来制成。一般来说还可以。
更换玻璃纤维