IVD抗体筛选经验你一定要知道！
随着生命科学的发展，对蛋白质的研究越来越多，抗体试剂在体外诊断中的重要性也越来越重要。面对复杂的抗体试剂市场，如何选择适合自己实验的抗体就显得尤为重要。
1、关于特异性的选择：
特异性的选择主要需要考虑四个方面：蛋白质特异性、物种特异性、实验方法特异性、标记特异性。
1. 蛋白质特异性：
为了找到需要检测的蛋白质的抗体，需要区分几个细节。检测重组表达蛋白和内源蛋白对抗体的要求是不同的。请查看抗体手册中的检测说明。如果重组蛋白不是全长表达，需要注意抗体的免疫原性区域是否在重组蛋白区域内。对于内源性蛋白质，最好了解它们是如何被切割和修饰的。对于具有特殊表型的蛋白质，应进行序列比较并与抗体免疫原序列结合以检查交叉反应性。磷酸化蛋白的检测需要确定具体位点，不同位点的磷酸化意味着可能存在不同的机制，因此不宜一概而论。
2. 物种特异性：
不同物种的同一蛋白质有或大或小的差异。目前商品化的抗体大多采用人类蛋白序列作为模板，重组蛋白或设计多肽抗原，根据蛋白的同源性与其他物种发生交叉反应。有必要参考说明书中标明的活性物质信息。很难找到一些稀有物种的抗体。您可以通过蛋白质序列比较来选择用于同源序列免疫的抗体。但一般来说，厂家不会接受他们的质量投诉。如果可以申请免费的抗体样品，这对于抗体的选择是有利的。
3、实验方法的特殊性：
目前，使用抗体的实验方法有很多种。在使用不同方法的过程中，由于蛋白质样品的处理方式不同，蛋白质含量不同，对抗体的识别表位和效价的要求也不同。具体按照说明书注明的产品使用方法进行选择。然而，制造商通常不会在各种实验中测试每种抗体。目前检测较多的只有WB、IHC、IF等。如果针对特定的实验方法、蛋白质序列分析和抗体的抗原信息没有找到合适的抗体，则尽可能选择有效的抗体。另外，申请免费抗体样品也是一个好方法。
4. 标记物的特异性
一般基于实验操作的实验方法不使用标记的一抗，如WB、IHC等，通过二抗试剂的标记来达到显示结果的目的。然而，一些基于仪器分析的实验可能会使用直接标记的一抗，例如流式细胞术实验。那么你需要知道你要使用的仪器可以检测到的荧光范围，并根据不同的参数要求选择相应的标记物。在免疫荧光双标记实验中，需要选择不同的荧光标记。
2. 抗体种类来源的选择：
有些人认为单克隆抗体比多克隆抗体更好。其实这并不是一个严谨的观点。只能说单克隆抗体的特异性可能比较好，而多克隆抗体的亲和力会比单克隆抗体好，特异性不好。肯定不如单克隆抗体，主要看抗原设计水平。目前商品化抗体中的单克隆抗体主要是小鼠单克隆抗体和兔单克隆抗体，多克隆抗体主要是兔多克隆抗体、山羊多克隆抗体等，其他物种的抗体较少。不建议纠结单克隆抗体还是多抗体比较好，能做实验的抗体才是好抗体。
在选择方面，一般建议实验物种与抗体物种亲和力越远越好，不宜同源。不同种类的抗体会影响二抗的匹配。尤其是在免疫荧光双标实验中，需要根据与实验种属的差异来区分两个指标的抗体种属的来源，以利于二抗的识别。
三、关于性价比的选择：
抗体的好坏仍然需要通过实验结果来呈现，但在选择抗体之前我们无法准确判断抗体的效果。无论什么品牌，无论进口还是国产，都会有好的产品，也会有做不到的产品。抗体是异质产品。不同品牌之间，甚至同一品牌不同产品之间，抗体质量存在明显差异，且没有统一的衡量标准。这是抗体选择中最困难的问题。很多人习惯根据实验室的传统意识或者参考文献中使用的产品来进行选择，但由于不同批次之间的抗体效果也不同，无法完全保证选择的正确性。在这种情况下，抗体的售后服务就显得尤为重要。当遇到抗体质量问题时，可以确保问题得到有效解决，而不影响实验进度。现在一些品牌可以免费提供抗体样品，这无疑很好地解决了这个问题。首先确定该抗体是否适合您的实验，避免因抗体质量投诉而延误实验安排。
在价格方面，您需要记住，最贵的不一定是最好的，而是最适合您的实验的。花很多钱购买昂贵的抗体并需要很长时间才能抱怨的情况并不少见。买对的东西，而不是买贵的东西。选择价格时还应注意规格大小、抗体浓度、效价范围等，综合考虑。从规格上来说，按照最终能稀释成的工作液量来计量更为准确。很多老品牌提供的抗体产品基本都是大包装。就单一课题的实验而言，过大的包装有时会造成大量浪费。
目前Proteintech、Bioworld、Cell Signal等品牌相继推出小包装抗体，一定程度上给了选择者更大的选择自由度。他们可以根据所用产品的效价计算出自己实际需要的抗体量，并进行精准定量采购。
四、品牌的选择：
由于抗体质量的参差不齐，大家都很注重抗体品牌的选择，但无论是什么品牌，都难免会遇到不适合自己实验的抗体。因此，一般建议考虑行业普遍认可的品牌，购买方便，技术支持专业，售后处理方便。有的甚至没有官方代理，只能是可选的。同时，购买时一定要找正规代理商，能够提供产品指导、实验分析、售后处理等，避免因购买假水货而影响实验。
5.关于其他小细节：
在抗体选择和使用的过程中，会遇到一些意想不到的事情。有些细节还是需要多加注意。例如，选择做封闭或中和实验时，有时需要在细胞培养基中添加抗体，需要注意抗体中是否含有叠氮化钠。如果是大包装的抗体，分装更经济。如果是高滴度抗体，可以制成母液，然后分装。对于抗体的短期运输，用普通冰块保温即可满足要求。
也不要在 WB 过程中陷入分子量的困境。很多时候，我们看到同一种抗体、不同品牌，甚至同一品牌的不同产品编号，其分子量是不同的。事实上，可能只是制造商使用了不同的物种和不同的样品类型进行测试，或者参考了不同的文献。对于用户来说，同一个样本，无论使用哪个品牌，只要抗体正确，目的条带只会出现在相同的位置。
关于分子量，一般不建议阅读产品说明。WB 中条带的位置由样品决定，不会因不同的抗体而变化。因此，在检测蛋白之前，我们可以利用数据库或参考文献对待检测蛋白有一个更全面的了解，包括其可能的裂解和修饰、表型等。第一次使用新抗体时，不要根据分子量水平切膜，可以保留几条完整的泳道，以便观察条带的位置或分布。
